細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程，供參考
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、*、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供最新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。公司產(chǎn)品僅用于科研，不得用于臨床．

注意事項：
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
腺苷酸環(huán)化酶9抗體

細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-酪酸叔丁酯，英文名或英文縮寫：L-Tyrosine tert-butyl ester，級別：特，98%，規(guī)格：5克

人腦血管平滑肌細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞，NCI-H1703[H1703]細(xì)胞 Hepa 1-6(肝癌細(xì)胞)三坐同 1,2,4-Triczolo[4,3-c]pyridin-3(2H)-onq 6969-71-7

人皮膚鱗癌細(xì)胞;A-431 [A431]分子篩13X型 MOLqCULcR SIqVq 6331-69-6

CD97 Others Human 人 CD97 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 司班80，英文名或英文縮寫：Span 80，級別：AR，85%，規(guī)格：25克

大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)GDX　101(聚二本多孔小球)NA
人胚胎膀胱組織來源細(xì)胞;CCC-HB-2 人肺動脈成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL香草醛（標(biāo)準(zhǔn)品）Vanillin 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2香草醛Vanillin 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

LAIR1 Others Mouse 小鼠 LAIR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 膽維丁（標(biāo)準(zhǔn)品）VITAMIN D4質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL葡醛酸鈉（標(biāo)準(zhǔn)品）4-FLUOROCINNAMONITRILE質(zhì)量規(guī)格：含量測定

WISH細(xì)胞，人羊膜細(xì)胞 普通變形桿菌 中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO DUX B11 Carrying pBSCRLc/pTCSgpt clone 35.6鹽酸羥胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Hydroxylammonium chloride質(zhì)量規(guī)格：檢查
腺病毒包裝人胚腎細(xì)胞表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞;293KB 人輸尿管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL壬烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物)Nonane質(zhì)量規(guī)格：>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

人腸平滑肌細(xì)胞RNAHISMC miRNA5 μgN-乙酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧胞苷DMT-Ac-dC質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

三.小鼠正常細(xì)胞保護胸甙(DMT-T)DMT-dT質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠髖動脈內(nèi)皮細(xì)胞;PIECDMT保護性脫氧尿苷DMT-dU質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

KM小鼠未分化神經(jīng)膠質(zhì)瘤瘤株;B22 小鼠破骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mLD-木糖(標(biāo)準(zhǔn)品)D-(+)-Xylose 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)胞接受后的處理：
1） 收到細(xì)胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
2） 請先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的的*培養(yǎng)基。
4） 如果細(xì)胞長滿（90%以上）請及時進行細(xì)胞傳代。
5） 接到細(xì)胞次日，請檢查細(xì)胞是否污染，